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酶標分析儀的免疫吸附試驗原理步驟

作者:admin    時間:2021-06-15 01:05:15    點擊次數(shù):1345
       酶標儀是一種應用非常廣泛的醫(yī)療設備。酶標分析儀免疫吸附試驗的基本原理如下:
1、先將多余的特異性抗體(或抗原)涂在載體(酶標板)上,通過抗原-抗體反應使副物質(抗原或抗體)和酶標(用hrp -辣根過氧化物)。酶標抗體或抗原)也與載體結合(固相分離)。洗去游離酶標簽后,添加底物。與載體結合的標記酶促進了底物的顏色。*后,利用光電比色法對測試對象進行定性判斷或定量測定。上述方法的靈敏度可達ng/ml水平。
2、包覆ELISA板:在ELISA板孔中加入特異性抗原溶液,4℃過夜。然后洗3到5次,清洗解決方案(檔板洗板),這樣的特異抗原的解決方案是牢牢地吸附在表面的microwell微量滴定板,形成固相抗原和殘余液體雜質沖走。
3、加入被包被抗原溶液(患者血清):如果被包被抗原溶液中含有被測抗體,經(jīng)孵育反應后,會與被包被抗原特異性結合,形成被包被抗原與被測抗體的復合物。它被吸附在微量滴定板的微孔表面。然后再次清洗,以清除殘留的液體和干擾物質。
4、添加酶偶聯(lián)物:孵育反應后,形成包被抗原+試驗抗體+酶標記抗原的三組分復合物,也吸附在微孔表面,再進行洗滌,去除游離或非特異性酶偶聯(lián)物(洗盤)污漬。
5、加顯色液:顯色反應10分鐘至20分鐘后,被吸附絡合物中的酶與顯色底物溶液形成顯色液。此時,由于游離或非特異性吸附的酶已被去除,溶液的顏色僅取決于已與被分析物結合的酶的數(shù)量,所以它能真實反映被分析物的濃度。酶凝固的越多,顏色就越深,這意味著被分析物的濃度就越大。
6、加停止液:停止顯色反應。
酶標儀檢測:將顯色的酶標板放在酶標儀上進行光電比色檢測。該儀器檢測空白孔、陰性和陽性對照孔、標準孔、質控孔和患者樣品孔的吸光度。值,并根據(jù)程序要求自動計算患者樣本中分析物的濃度或進行定性分析。

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