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酶標(biāo)檢測(cè)儀單波長(zhǎng)與多波長(zhǎng)應(yīng)用解析原理

作者:admin    時(shí)間:2021-06-15 01:18:09    點(diǎn)擊次數(shù):1406
          酶標(biāo)檢測(cè)儀的波長(zhǎng)應(yīng)用解析原理。當(dāng)酶標(biāo)檢測(cè)儀采用單波長(zhǎng)測(cè)量吸光度時(shí),除了測(cè)量過(guò)程中的內(nèi)源干擾(包括噪聲、漂移、電壓等)外,液體的表面張力也會(huì)對(duì)其產(chǎn)生較大的影響。在檢測(cè)過(guò)程中,由于液體表面的表面張力,液體表面不是平坦的表面,而是凹面,從側(cè)面看像凹透鏡,必然會(huì)影響光路的正常通過(guò)。由于液體表面的凹面的影響,當(dāng)光線通過(guò)液體表面時(shí),除了一部分通常被液體吸收外,還有一部分被折射和反射(如光線通過(guò)凹透鏡),這就影響了吸光度的檢測(cè)。微孔板閱讀器使用點(diǎn)光源,通過(guò)光纖。如果每次都能在同一位置檢測(cè)到,就保證了吸光度的重復(fù)性。然而,由于機(jī)械運(yùn)動(dòng)引起的誤差,不可能保證每個(gè)孔都在相同的位置。部分被檢測(cè)到,所以孔與孔之間有一定的區(qū)別。
      酶標(biāo)檢測(cè)儀的波長(zhǎng)應(yīng)用解析,在雙波長(zhǎng)測(cè)量中,減少了測(cè)量干擾和電路干擾,使測(cè)量結(jié)果顯著提高。由于液體表面張力的差異,單波長(zhǎng)測(cè)量的誤差比較大。另外,使用不同的洗滌劑會(huì)影響*后一次添加后的底物和終止液的水平。用添加了表面活性劑的洗滌劑清洗后,產(chǎn)生的液位會(huì)更凹,這對(duì)單波長(zhǎng)檢測(cè)有更大的影響。它與表面活性劑的濃度成正比。用中性蒸餾水洗滌后,單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)技術(shù)的結(jié)果基本相同。
      酶標(biāo)檢測(cè)儀在酶聯(lián)免疫法測(cè)定抗原、抗體中,常用標(biāo)記酶辣根過(guò)氧化物酶所使用的底物一般是鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺,顯色終止后,二者在6 3 0nm 和6 5 5nm處的吸光度值都只在吸收峰處 (4 9 2 n m/4 5 0 nm )吸光度值的 1 %以下,因此,利用雙波長(zhǎng)檢測(cè),不會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。建議在進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)時(shí), 酶標(biāo)儀比色應(yīng)該首先雙波長(zhǎng)。這樣可以提高臨界值處標(biāo)本的分析準(zhǔn)度, 減少實(shí)驗(yàn)誤差。

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