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酶標(biāo)儀測量波長的設(shè)定以什么為標(biāo)準(zhǔn)?酶標(biāo)儀和普通的光電比色的差異

作者:超級管理員    時間:2022-03-10 15:39:41    點(diǎn)擊次數(shù):1736
 

    實(shí)驗(yàn)中波長的選擇主要依賴于你要測的樣品。樣品在不同的波長下,對光的吸收值也不同,但都有一個吸收峰,一般選擇吸收峰時的波長進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。比如同樣是MTT法做細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),就有使用490nm和570nm兩種波長選擇,如果使用了DMSO作為試劑,在溶解后呈紫(紅)色,在490nm有*大吸收值;而對于SDS和酸化異丙醇,則選用570nm(655nm作為參考波長)。

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    酶標(biāo)儀波長設(shè)定還要看你用的是什么酶標(biāo)儀,如果是光柵式單色器(可以1nm步進(jìn)調(diào)節(jié)),就可以直接設(shè)定吸收峰的波長;如果是濾光片式單色器,因?yàn)槭転V光片波長限制,有時你就需要選接近使用波長的濾光片,比如655nm,你就可能選用650nm的濾光片。


    酶標(biāo)儀和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:


    (1)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體。


    (2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光來都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。


    (3)酶標(biāo)儀通常不僅用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度。


    酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動和手動2種之分。自動型的儀器有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu),可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試,手動型則靠手工移動微孔板來進(jìn)行測量。


    在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)僅,此類酶標(biāo)僅一般都是自動化型的。它設(shè)有多個光束和多個光電檢測器,如12個通道的儀器設(shè)有12條光束或12個光,12個檢測器和12個放大器,在X方向的機(jī)械驅(qū)動裝置的作用下,樣品12個為一排被檢測。多通道酶標(biāo)儀的檢測速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價格也較高。


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