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使用酶標分析儀檢測酸奶中三聚氰胺的操作步驟

作者:admin    時間:2021-05-21 05:53:58    點擊次數(shù):1232
 

   使用酶標分析儀檢測酸奶中三聚氰胺的操作步驟。首先將三聚氰胺酶標記物、樣品提取液和標準品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔,并用提取液搖勻測定。在30分鐘的孵育過程中,樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭,與微孔中的三聚氰胺抗體結合。孵育30分鐘后,微孔中所有未結合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后,在每孔中加入一種清晰的底物溶液,結合酶標儀將無色底物轉化為藍色物質。孵育30分鐘后停止反應,根據各孔顏色深度讀取數(shù)據。根據標準顏色,得到樣品中三聚氰胺的濃度值。

一、酶標儀檢測酸奶中三聚氰胺需要準備的材料:

1、蒸餾水或去離子水

2、可吸取50ul100ul的移液器及吸頭

34000轉離心機

4、吸水紙或相當?shù)奈牧?/span>

5、450nm的酶標儀

6、計時器

7、20mM PBS:需自行配制

8、清洗液:需自行配制

二、酶標儀檢測酸奶中三聚氰胺試劑配制:

120mM PBS 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml

2、清 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

三、酶標儀檢測酸奶中三聚氰胺樣品的前處理:    酸奶(稀釋倍數(shù):25

1、取2ml酸奶;

2、加入8ml20Mmpbs,混勻,測定PH值(ph=5.6左右);

3、加入180ul 0.1MNaOH,ph值調整到7左右;

4、取200ul加入到0.8ml10%甲醇/20mMPBS中,混勻,取150ul測定;

四、酶標儀檢測酸奶中三聚氰胺測定過程:

1、將所有試劑及樣品回升至室溫20-28℃,但不要放置超過24小時;

2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條固定在微孔板架上,未使用的孔條與干燥劑一同放入密封袋中保存;

3、吸取150ul標準品、樣品到對應微孔中,必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取,避免交叉污染。加入50ul三聚氰胺酶標記物到每個小孔中;

4、輕輕搖板60秒,20-28攝氏度下孵育30分鐘;

5、將微孔中的溶液倒入水槽中,用清洗液完全充滿微孔,震蕩后倒掉,重復三次,總共四次洗板;

6、等一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻轉微孔板在吸水紙上拍干;

7、每個微孔中加入100ul底物溶液;

8、20-28攝氏度下,孵育30分鐘;

9、每個微孔中加入100ul停止液;

10、使用萊恩德酶標儀450nm下讀板

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